细胞培养
细胞复苏
1.准备工作:水浴锅37℃,血清4℃解冻,PS常温解冻,不完全培养基一瓶,50ml离心管
2.配完全培养基:500ml不完全培养基+55ml血清+25ml PS(双抗),分装至50ml离心管
3.将细胞从液氮罐取出,镊子夹住放37~40℃,轻摇1min左右至融化
4.转至超净台,取15ml离心管+4ml完全培养基+融化的细胞
5.离心1000rpm,3min,RT
6.弃上清,加2ml完全培养基重悬细胞
7.取10cm的培养皿+8ul完全培养基+2ml细胞,显微镜下观察后,放入培养箱
细胞传代
1.弃去培养基,加3ml预温的PBS洗两次
2.加2-3ml胰酶(RAW264细胞直接用PBS+EDTA吹打),放入培养箱3min消化
3.加3ml预温的完全培养基终止消化,将细胞全部吸至15ml离心管
4.离心 1000rpm,3min,RT
5.弃上清,用2ml-3ml完全培养基(按1:3~1:5传代)重悬细胞
6.取10cm的培养皿+8ul完全培养基+1ml细胞,显微镜下观察后,放入培养箱
细胞铺板
1.弃去培养基,加3ml预温的PBS洗两次
2.加2-3ml胰酶(RAW264细胞直接用PBS+EDTA吹打),放入培养箱3min消化
3.加3ml预温的完全培养基终止消化,将细胞全部吸至15ml离心管
4.离心 1000rpm,3min,RT
5.弃上清,用2m完全培养基重悬细胞,取15ul至细胞计数板,进行细胞计数
6.铺6孔板(每孔细胞密度为10^6):培养基+细胞体系为500ul
铺12孔板(每孔细胞密度为10^5):培养基+细胞体系为1ml
7.“十”字或“∞”字轻摇,混匀细胞后放入培养箱
细胞冻存
1.弃去培养基,加3ml预温的PBS洗两次
2.加2-3ml胰酶(RAW264细胞直接用PBS+EDTA吹打),放入培养箱3min消化
3.加3ml预温的完全培养基终止消化,将细胞全部吸至15ml离心管
4.离心 1000rpm,3min,RT
5.弃上清,用3ml细胞冻存液(90%血清+10%DMSO)重悬细胞
6.将细胞分装至冻存管(每管1ml),4℃ 2H,-20℃ 2H,-80℃ 过夜,液氮保存。
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