细胞培养

细胞复苏

1.准备工作：水浴锅37℃，血清4℃解冻，PS常温解冻，不完全培养基一瓶，50ml离心管

2.配完全培养基：500ml不完全培养基+55ml血清+25ml PS（双抗），分装至50ml离心管

3.将细胞从液氮罐取出，镊子夹住放37~40℃，轻摇1min左右至融化

4.转至超净台，取15ml离心管+4ml完全培养基+融化的细胞

5.离心1000rpm，3min，RT

6.弃上清，加2ml完全培养基重悬细胞

7.取10cm的培养皿+8ul完全培养基+2ml细胞，显微镜下观察后，放入培养箱

细胞传代

1.弃去培养基，加3ml预温的PBS洗两次

2.加2-3ml胰酶（RAW264细胞直接用PBS+EDTA吹打），放入培养箱3min消化

3.加3ml预温的完全培养基终止消化，将细胞全部吸至15ml离心管

4.离心 1000rpm，3min，RT

5.弃上清，用2ml-3ml完全培养基（按1:3~1:5传代）重悬细胞

6.取10cm的培养皿+8ul完全培养基+1ml细胞，显微镜下观察后，放入培养箱

细胞铺板

1.弃去培养基，加3ml预温的PBS洗两次

2.加2-3ml胰酶（RAW264细胞直接用PBS+EDTA吹打），放入培养箱3min消化

3.加3ml预温的完全培养基终止消化，将细胞全部吸至15ml离心管

4.离心 1000rpm，3min，RT

5.弃上清，用2m完全培养基重悬细胞，取15ul至细胞计数板，进行细胞计数

6.铺6孔板（每孔细胞密度为10^6）：培养基+细胞体系为500ul

铺12孔板（每孔细胞密度为10^5）:培养基+细胞体系为1ml

7.“十”字或“∞”字轻摇，混匀细胞后放入培养箱

细胞冻存

1.弃去培养基，加3ml预温的PBS洗两次

2.加2-3ml胰酶（RAW264细胞直接用PBS+EDTA吹打），放入培养箱3min消化

3.加3ml预温的完全培养基终止消化，将细胞全部吸至15ml离心管

4.离心 1000rpm，3min，RT

5.弃上清，用3ml细胞冻存液（90%血清+10%DMSO）重悬细胞

6.将细胞分装至冻存管（每管1ml），4℃ 2H，-20℃ 2H，-80℃ 过夜，液氮保存。

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